Discusión sobre los factores que influyen en el teñido de Gram

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【Extractos】：

Factores que influyen en la tinción de Gram La tinción de Gram es uno de los métodos de tinción diferencial más clásicos y más utilizados en bacteriología. Fue pionero del bacteriólogo danés Cristian Gram. Los métodos de tinción de Gram generalmente incluyen tinción inicial, tinción mordiente, decoloración y contratinción. Cuatro pasos, el método de operación específico es: fijar el frotis; teñir con violeta de cristal de oxalato de amonio durante 1 minuto, enjuagar con agua corriente; solución de yodo para cubrir el teñido de la superficie recubierta durante 1 minuto; lavar, absorber agua con papel absorbente; agregar unas gotas de alcohol al 95% y luz Agite ligeramente para decolorar, lave con agua después de 30S y absorba agua; después de teñir con la solución de colorante rojizo (diluir) durante 30S, enjuague con agua corriente, seque e inspeccione con un microscopio. Mancha

Discusión sobre los factores que influyen en el teñido de Gram

Tinción de GramUno de los métodos de tinción diferencial más clásicos y comúnmente utilizados en bacteriología.，Por el bacteriólogo danés Cristian Gram Primero，Método de tinción de Gram般Incluye cuatro pasos: teñido inicial, teñido mordiente, decoloración y contratinción，Los métodos de operación específicos son: arreglar el frotis; teñir con cristales de oxalato de amonio durante 1 minuto y lavar con agua del grifo; cubrir la superficie recubierta con yodo durante 1 minuto; lavar, usar papel absorbente de agua para absorber el agua; agregar unas gotas de alcohol al 95% y agitar Decoloración, lavado con agua después de 30S y absorción de agua; después de teñir con solución de tinción de fucsina (delgada) durante 30S, enjuagar con agua corriente, secar e inspeccionar con microscopio. Como resultado de la tinción, las bacterias reactivas positivas de Gram eran moradas, y las bacterias reactivas negativas eran rojas. Sin embargo, en nuestros resultados de tinción reales, especialmente al principio, algunos errores a menudo hacen que los resultados de tinción sean inconsistentes con los resultados reales, que pueden verse afectados por los siguientes factores.

1 Factores operacionales

1.1 Frotis demasiado espeso Durante el frotis, hay demasiadas bacterias para recoger, y no se pueden separar, y el color del cristal violeta teñido en el primer paso no se puede eliminar durante la decoloración, lo que puede hacer que las bacterias Gram-negativas aparezcan de color púrpura, lo que se confunde con bacterias Gram-positivas. .

1.2 Tiempo de decoloración La permeabilidad de las bacterias positivas es pequeña y no es fácil decolorarla. La permeabilidad de las bacterias negativas es grande y es fácil de decolorar. Sin embargo, esto es un resultado en una condición de tiempo fijo. El cristal violeta teñido se decolora y finalmente se tiñe con un color rojizo para convertirse en una bacteria Gram-negativa. Si el tiempo de decoloración es demasiado corto, el cristal violeta teñido por las bacterias negativas no puede decolorarse por completo, y aparece el púrpura, que se confunde con bacterias Gram-positivas.

1.3 Método fijo La fijación no solo puede matar las bacterias y cambiar la permeabilidad de las bacterias al tinte, sino que también hace que las bacterias se adsorban en el portaobjetos de vidrio y mantengan la estructura morfológica original. El método de fijación es pasar el frotis bacteriano seco a través de la llama tres veces a una velocidad moderada, y es apropiado tocar la piel del dorso de la mano sin que el vidrio esté caliente. Sin embargo, en la práctica, algunos estudiantes asaron el tobogán en la llama durante demasiado tiempo, lo que cambió la permeabilidad original de la bacteria y provocó un cambio en la tinción de la bacteria. Afecta el resultado de la tinción.

2 Factor bacteriano

2.1 Tiempo de cultivo bacteriano La morfología típica y la capacidad de teñido de las bacterias se encuentran en la fase de crecimiento logarítmico. La tinción de Gram de las bacterias en este momento puede reflejar la verdadera capacidad de teñido de las bacterias. Si las bacterias se cultivan durante demasiado tiempo y se convierten en bacterias envejecidas, la tinción cambiará, lo que puede hacer que las bacterias Gram-positivas se conviertan en bacterias Gram-negativas.

2.2 Composición del medio En general, se cree que las bacterias Gram-positivas contienen un complejo especial de la proteína nuclear de magnesio, sal y polisacárido, que se une fuertemente al complejo de yodo y cristal violeta, y no es fácil de decolorar. Sin embargo, si la falta de sal de magnesio de proteína nuclear en el medio no puede sintetizar la sal de magnesio de proteína nuclear de los componentes bacterianos del cuerpo, la bacteria no se combinará firmemente con el complejo de yodo y cristal violeta, y se decolorará fácilmente. Bacterias negativas.

3 Factor de teñido

3.1 Solución de yodo El yodo como mordiente puede aumentar la afinidad del tinte y el objeto. Si la solución de yodo se deja por mucho tiempo, o si es ineficaz debido a la luz solar, y pierde el papel de mordiente, puede causar que el violeta cristalino se una débilmente a las bacterias y se decolore fácilmente, haciendo que las bacterias Gram-positivas se conviertan en bacterias Gram-negativas.

3.2 Violeta cristal Si la concentración de violeta cristal es demasiado alta, el alcohol no decolorará fácilmente el color teñido, lo que puede causar que las bacterias Gram-negativas se conviertan en bacterias Gram-positivas.

3.3 AlcoholEl alcohol se usa como agente decolorante. La concentración de alcohol blanqueado en la tinción de Gram es del 95%. A esta concentración, el cristal violeta teñido por bacterias Gram-positivas no se puede eliminar fácilmente, y el púrpura se retiene. Y finalmente se puso rojo. Sin embargo, cuando la concentración de alcohol es del 70%, su capacidad de decoloración es la más fuerte, lo que puede eliminar el cristal violeta manchado por bacterias Gram-positivas y manchar las bacterias Gram-positivas como bacterias Gram-negativas.

En resumen, otros factores que afectan la tinción, así como la estructura de las células bacterianas y la permeabilidad de sus membranas externas, como la permeabilidad de la membrana celular, el tamaño de los poros de la membrana y la integridad de la estructura celular, juegan un papel importante en la tinción. Cierto efecto. Además, la composición del medio de cultivo, la edad de las bacterias, el contenido del dieléctrico en la solución de tinción, el pH, la temperatura y los efectos de los medicamentos también pueden afectar la tinción de las bacterias, por lo que debemos prestar atención cuando los resultados no sean consistentes con los resultados esperados. La influencia de estos factores debe tenerse en cuenta al considerar esto.

Máquina de teñido automático -DYE，El proceso de tinción está completamente automatizado, solo los portaobjetos deben cargarse y el resto no requiere intervención manual. Cuando se completa la tinción, los portaobjetos se han centrifugado y secado, y el proceso de tinción estándar (fijación, tinción inicial violeta cristal, enjuague, mordiente de yodo, enjuague, Decoloración + contratinción y secado), el principio de teñir con tecnología de micro-remojo, para garantizar que la solución de tinción esté en contacto total con el frotis, ahorrando el uso de reactivos y sin contaminación cruzada entre los portaobjetos, lo que puede reducir los factores anteriores que afectan el resultado de la tinción tanto como sea posible, asegurando el resultado Precisión

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